[VIP第1年] 指数:3
反应体系为20μl，由10μl2×mastermix(德国qiagen公司)、1μl标准品2800m水溶液、引物混合物和无核酶水组成。该反应体系中，各个引物的浓度见表1中第5列。反应程序：95℃5min；95℃30s，60℃2min，72℃2min，28个循环；72℃5min；4℃保存。3、纯化和定量(1)取pcr扩增产物，按照pcrpurificationkit的说明书步骤进行纯化，得到pcr纯化产物。(2)将pcr纯化产物按照qubittmdsdnahsassaykit说明书，采用，得到pcr纯化产物的浓度。4、文库制备取pcr纯化产物，按照truseqdnapcr-freehtlibraryprepkit的说明书操作步骤依次进行末端修复、末端修复产物纯化、连接a-tail、连接adapter和连接产物的纯化，然后按照kapalibraryquantificationkit的说明书步骤进行文库定量及文库标准化，完成文库制备。5、上样测试取步骤4制备的文库，使用miseqreagentkitv3-600cycles测序试剂于miseqfgx二代测序仪上进行测序。6、数据分析测序结束后仪器自动生成fastq文件，使用。运行，在notepad中录入68个基因座基因配置文件。基因座基因配置文件如下：①基因座名称，②y，③正向引物后12个碱基，④反向引物前12个碱基的反向互补序列，⑤该基因座**序列的两个重复单元，⑥一个重复单元的碱基数。迈杰转化医学可以提供覆盖肺ai、肠ai、肝ai，上海Claudin18，上海Claudin18，上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台口碑推荐.2迈杰转化医学NGS平台口碑推荐.2迈杰转化医学NGS平台口碑推荐、胃ai、乳腺ai、前列腺ai等多种实体瘤的上百项检测项目。上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台口碑推荐
第三代测序技术以PacBio公司的SMRT技术和OxfordNanoporeTechnologies公司的纳米孔单分子技术为**的新一代测序技术被称为第三代测序技术，与前两代测序技术相比，其比较大的特点就是单分子测序，测序过程无需进行PCR扩增，并且理论上可以测定无限长度的核酸序列。PacBio技术平台SMRT芯片是一种带有很多ZMW孔的厚度为100nm的金属片，将DNA聚合酶、待测序列和不同荧光标记的dNTP放入ZMW孔的底部。荧光标记的位置是磷酸基团，当一个dNTP被添加到合成链上的同时，它会进入ZMW孔的荧光信号检测区，根据荧光的种类就可以判定dNTP的种类，从而获得核酸的碱基序列信息。ZMW孔PacBio平台测序原理每个ZWM孔只允许一条DNA模板进入，DNA模板进入后，DNA聚合酶与模板结合，加入4种不同颜色荧光标记4种dNTP，其通过布朗运动随机进入检测区域并与聚合酶结合从而延伸模板，与模板匹配的碱基生成化学键的时间远远长于其他碱基停留的时间，因此统计荧光信号存在时间的长短，可区分匹配的碱基与游离碱基。通过统计4种荧光信号与时间的关系，即可测定DNA模板序列。 北京专注迈杰转化医学NGS平台推荐咨询迈杰转化医学具体包括全套的Leica组织样本制备系统，Ventana、Leica、DAKO等全自动免疫组化仪。
既节约时间又降低测序成本。目前，基于法庭科学领域运用**多的ngs系统为illumina公司的miseqfgxtm系统和thermofisher公司的iontorrentpgmtm系统，但针对以上平台的二代测序商业化str分型试剂盒的研发尚处于起步阶段，主要有powerseqautosystem(promega，madison，wi,usa)、forenseqtmdnasignatureprepkit(illumina，sandiego，ca，usa)和precisionidglobalfilerngsstrkit(termofisher，waltham，ma，usa)。但以上试剂盒涉及的y-str相对较少，三个试剂盒分别包含了1个y-str基因座、26个y-str基因座、2个y-str基因座。同时存在试剂盒价格昂贵，配套的数据分析软件只能针对各自开发试剂盒，参数的设置相对固定，只能对固有基因座的测序数据进行分析，不利于法医学实际应用。因此，构建一种适用于当前主流二代测序检测平台miseqfgxtm系统及开放性测序数据分析软件straitrazor、myflq等，且能容纳更多y-str基因座的复合扩增体系具有一定的意义。技术实现要素：本发明的目的是制备检测更多y-str基因座的试剂盒，提高了父系亲缘关系分析能力和鉴定效能。本发明首先保护引物组合，可包括引物1—引物120；引物1—引物120均为单链dna分子，核苷酸序列依次可如seqid**—seqid**20所示。
实施例3、实施例1制备的试剂盒的准确性验证1、取1ng标准品2800m、样本一、样本二或样本三(见实施例2中步骤二)，按照yfilerpluspcramplifcationkit(thermofisherscientific)的说明书步骤进行毛细管电泳检测，得到各个基因座的等位基因基因型。分型结果见表4。表4注：m为毛细管电泳检测技术的分型结果，e为二代测序技术的分型结果。2、按照实施例2中步骤一的方法检测标准品2800m、样本一、样本二或样本三，得到各个基因座的等位基因基因型。分型结果见表4。结果表明，实施例1制备的试剂盒与yfilerpluspcramplifcationkit重合的基因座，在标准品2800m、样本一、样本二和样本三中的分型结果完全一致。实施例4、实施例1制备的试剂盒中引物具有不可替换性实施例1制备的试剂盒是本发明的发明人经过大量实验获得的，主要包括扩增各个基因座引物的反复调试和引物浓度的摸索。由于复合的基因座数目较多，引物间相互抑制情况复杂，所以试剂盒中用于扩增各个基因座的引物不可替换。1、设计并合成表5中第2列所示的、用于扩增65个str基因座的引物，然后混合，获得引物混合物1。设计并合成表5中第4列所示的、用于扩增66个str基因座的引物，然后混合，获得引物混合物2。 PMS2抗体试剂 苏苏械备20180570号.
2015年一项针对4853例各类实体瘤NGS研究表明，FGFR的功能异常发生于7.1%的**样本中，其中基因扩增、基因突变以及染色体重排分别占比为66%、26%及8%，FGFR1、FGFR2、FGFR3及FGFR4在发病患者中占比为3.5%、1.5%、2.0%及0.5%。发生率较高的**有尿路上皮*、胆管*、乳腺*、子宫内膜*、鳞状上皮*等，同时，在肺*、肝*等**中也发现了FGFR的异常***（图3）。图3各类实体瘤中FGFR突变频率[1]04FGFR抑制剂研究现状FGFR抑制剂有望成为泛*种靶向***的新选择，所以FGFR靶点在**领域受关注度极高，目前国内多家药企布局FGFR靶向疗法的研究开发（表2）。表2中国的FGFR抑制剂研发现状05FGFR抑制剂生物标志物研究FGFR抑制剂获批和在研药物，以及相应的临床试验生物标志物研究总结如表3。表3FGFR抑制剂及临床试验生物标志物[7-9]检测FGFR基因变异包括融合、重排、扩增和点突变以及其配体的过表达等，涉及DNA、RNA和蛋白质表达等多个生物学层面，检测方法主要有NGS，qPCR，FISH，IHC以及RNAscope等（表4）。迈杰转化医学蛋白免疫产品开发平台可提供基于IHC平台的体外诊断试剂盒以及蛋白抗体原料一站式开发服务。江苏抗体全迈杰转化医学NGS平台经验丰富
迈杰转化医学目前已完成约30+靶点的方法学验证，50+靶点的方法学建立。上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台口碑推荐
实施例3、实施例1制备的试剂盒的准确性验证1、取1ng标准品2800m、样本一、样本二或样本三(见实施例2中步骤二)，按照yfilerpluspcramplifcationkit(thermofisherscientific)的说明书步骤进行毛细管电泳检测，得到各个基因座的等位基因基因型。分型结果见表4。表4注：m为毛细管电泳检测技术的分型结果，e为二代测序技术的分型结果。2、按照实施例2中步骤一的方法检测标准品2800m、样本一、样本二或样本三，得到各个基因座的等位基因基因型。分型结果见表4。结果表明，实施例1制备的试剂盒与yfilerpluspcramplifcationkit重合的基因座，在标准品2800m、样本一、样本二和样本三中的分型结果完全一致。实施例4、实施例1制备的试剂盒中引物具有不可替换性实施例1制备的试剂盒是本发明的发明人经过大量实验获得的，主要包括扩增各个基因座引物的反复调试和引物浓度的摸索。由于复合的基因座数目较多，引物间相互抑制情况复杂，所以试剂盒中用于扩增各个基因座的引物不可替换。1、设计并合成表5中第2列所示的、用于扩增65个str基因座的引物，然后混合，获得引物混合物1。设计并合成表5中第4列所示的、用于扩增66个str基因座的引物，然后混合，获得引物混合物2。上海Claudin18.2迈杰转化医学NGS平台口碑推荐
迈杰转化医学按照ISO 13485和GMP要求，建立了覆盖全平台的产品研发实验室，用于产品研发。实验室能够开展抗体研发，PCR产品、NGS产品、病理产品以及产品化学发光的研发，同时建立了**的产品质检实验室和洁净质检实验室研发实验室已获的欧盟 ISO 13485 认证证书，满足IVD/CDx 产品研发要求，通过NMPA 质量体系考核。
按照GMP和ISO 13485的要求建立覆盖全平台产品生产的生产车间，可以满足I、II、III类各类IVD产品的生产要求，同时建立了4 ℃ 冷藏库和 -20 ℃ 冷冻仓库，满足IVD和医疗器械产品的GSP要求。
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