HCG金标免疫试验:金标免疫试验的原理将氯金酸(HAuCl4)用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)标记抗体,(或金黄色葡萄球菌A蛋白SPA)。金标为一种催化剂,经还原剂(如对苯二酸)处理,贵州读数仪零售价格,将显影剂中的银离子还原成不溶性金属银,沉淀在每个金颗粒的周围,银沉淀在光镜下可清楚地显示。滴金免疫实验原理同一般免疫斑点实验,也是用已知抗原或抗体包被硝酸纤维素膜,贵州读数仪零售价格,再用金标记抗体或抗原进行快速测定,贵州读数仪零售价格。临床应用的有两种方法:金标一步法(层析法)和金标二步法(斑点渗漏法)。读数仪哪家好?请认准无锡天纵易骏。贵州读数仪零售价格
标记:胶体金与蛋白质(IgG)的结合:将胶体金和IgG溶液分别以,电磁搅拌IgG溶液,加入胶体金溶液,继续搅拌10min,加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5%胎牛血清(BSA)和1%聚乙二醇(分子量20KD)。加入量:5%BSA使溶液终浓度为1%;1%聚乙二醇加至总溶液的1/10.在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的,在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量大。步骤:①用0、1mol/LK2CO3或(标记SPA时调到)。②于100ml金溶胶中加入合适标记量的蛋白质溶液(体积为2~3ml),搅拌2~3分钟。③加入5ml1%PEG20000溶液。④于10000~100000g离心30~60分钟(根据粒径大小选择不同离心条件),小心吸去上清液(切忌倾倒)。⑤将沉淀悬浮于一定体积含~,离心沉淀后,再用同一缓冲液恢复,浓度以A1cm/540nm=,以,置4℃保存。⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于SephadexG-200柱进行凝胶层析分离纯化,以含%BSA的缓冲溶液洗通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为。 中国香港手持式胶体金读数仪定制无锡天纵易骏可供应各类读数仪,请放心合作。
胶体金的颜色溶胶的颜色取决于分散相物质的颜色、分散相物质的分散度和入射光线的种类,是散射光线还是透射光,粒子越小,分散度越高,则散射光的波长越短。对同一种物质的水溶胶来说,粒子大小不同,呈现的颜色亦不同。如胶体金颗粒在5~20nm之间,吸收波长520nm,呈红色的葡萄酒色;20~40nm之间的金溶胶主要吸收波长530nm的绿色光,溶液呈深红色;60nm的胶体金溶胶主要吸收波长600nm的橙黄色光,溶液呈蓝紫色。一般应用于免疫组织化学的胶体金颗粒为5~60nm范围内,溶液呈现红色。在相当的一段时期内保持其溶胶不变性,称为胶体金的稳定性。影响其稳定性的因素主要是电解质,其次是胶体金本身的浓度、温度及其他非电解质等。
胶体金标记蛋白质的分离纯化:各种方法所得到的胶体金颗粒直径,是大多数颗粒的平均直径。实际工作中所得到的胶体金,是各种近似直径颗粒的混合体,标记过程中,并不是所有金颗粒都可以得到稳定。因此,胶体金标记蛋白质后,必须进行分离纯化,以除去未参与标记的过量蛋白质、未稳定的金颗粒及各种可能形成的聚合物。在胶体金标记蛋白质过程中,除严格控制胶体金的制备工艺外,标记后选择合适的纯化方法十分关键。金标蛋白质的分离纯化与同位素、荧光素、发光剂及酶标抗体的纯化方法不同,其主要特点是金标蛋白质的质量大,并以溶胶形式存在,对纯化过程中的pH值、离子强度变化及某些杂质等因素较为敏感,不易采用盐析、离子交换、亲合层析等常规方法进行分离。目前主要采用超速离心和凝胶过滤两种纯化方法。内置大容量存储器,检测结果自动存于仪器内部存储器中。
胶体金免疫层析技术是20世纪80年代发展起来的,其基本原理与免疫渗滤技术相同。由于其稳定性好、安全、简便,且不需任何仪器设备等优点,被应用于医学检测、农产品农药兽药残留、进出口产品病原微生物检测等领域。免疫层析技术在层析材料上发生的免疫反应,具备免疫反应的高特异性、高效率性、高亲和性的特点。具体过程含有待测物的样品溶液通过纤维层析材料的毛细作用沿着层析材料上移,与固定在层析材料上的针对待测物的受体(抗原或抗体)结合并发生特性免疫反应。在该过程中,抗原抗体复合物不断被积累富集,通过酶反应标记物或直观可视标记物(如胶体金)使之显色,从而达到检测目标物质的目的。通过仪器辨别试纸条颜色变化,能够避免人为判读所造成的主观误差。中国香港手持式胶体金读数仪定制
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半定量与定量:在测定一般正常体液中存在而在疾病时升高的物质时,如单以超过正常参考值上限为阳性界限往往不能满足临床要求。胶体金显色深浅与被测物浓度有一定相关性,因此可对被测物进行定量检测。金标定量:1、DIGFA:膜上斑点免疫金标显色终点时用光电比色2、DIGCA:由于反应在NC膜上呈横流推进,测定线上反应出现的颜色逐渐加深,液流速度、反应温度等为可变因素,很难在规定时间得到恒定结果。金标半定量:1.DIGFA2、2.DIGCA。贵州读数仪零售价格
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